Sebuah tim yang dipimpin oleh seorang ilmuwan biomedis di University of California, Riverside, telah mengembangkan metode pengurutan RNA baru – “Tampilan RNA Panoramik dengan Mengatasi Pengurutan Modifikasi RNA yang Dibatalkan,” atau PANDORA-seq – yang dapat membantu menemukan banyak modifikasi kecil RNA yang sebelumnya tidak terdeteksi.

RNA memainkan peran sentral dalam memecahkan kode informasi genetik dalam DNA untuk menopang kehidupan suatu organisme. Secara umum dikenal sebagai molekul perantara yang digunakan untuk mensintesis protein dari DNA. Sel penuh dengan molekul RNA dalam bentuk yang kompleks dan beragam, dua tipe utama adalah RNA ribosom, atau rRNA; dan mentransfer RNA, atau tRNA; yang terlibat dalam sintesis protein.
RNA kecil memainkan peran penting dalam kesehatan dan penyakit, termasuk kanker, diabetes, penyakit saraf, dan kemandulan. Contoh RNA kecil adalah microRNA; RNA yang berinteraksi dengan piwi, atau piRNA; dan RNA kecil yang diturunkan dari tRNA, atau tsRNA. RNA kecil dapat dimodifikasi oleh gugus kimia dan dengan demikian memperoleh fungsi baru.
Perkembangan teknologi sekuensing RNA throughput tinggi – berguna untuk memeriksa kuantitas dan urutan RNA dalam sampel biologis – telah mengungkap repertoar populasi RNA kecil yang berkembang yang menyempurnakan ekspresi gen dan melindungi genom.
“PANDORA-seq dapat digunakan secara luas untuk membuat profil lanskap RNA kecil dalam berbagai kondisi fisiologis dan penyakit untuk memfasilitasi penemuan regulasi kunci RNA kecil yang terlibat dalam kondisi ini,” kata Qi Chen, asisten profesor ilmu biomedis di UCR School of Medicine. , yang memimpin penelitian yang diterbitkan hari ini di Nature Cell Biology . “RNA kecil yang dimodifikasi memakai ‘jubah tak terlihat’ yang mencegahnya terdeteksi oleh metode pengurutan RNA tradisional. Ada berapa banyak RNA yang dimodifikasi seperti itu? Dari mana asal urutannya? Dan apa sebenarnya fungsi biologisnya? Ini adalah pertanyaan PANDORA-seq mungkin bisa menjawab. “
PANDORA-seq menggunakan perlakuan enzimatis bertahap untuk menghilangkan modifikasi RNA utama, yang kemudian melepas jubah tembus pandang yang digunakan oleh RNA kecil yang dimodifikasi.
“PANDORA-seq telah membuka kotak Pandora yang berisi RNA kecil,” kata Tong Zhou, ahli bioinformatika di University of Nevada, Reno School of Medicine dan rekan penulis studi tersebut. “Sekarang kita bisa berdansa dengan rekan yang tadinya tak terlihat ini di ballroom RNA.”

Menurut Chen, PANDORA-seq mengungkap lanskap RNA kecil yang mengejutkan yang didominasi oleh tsRNA dan RNA kecil yang diturunkan dari rRNA, atau rsRNA, daripada mikroRNA, yang sebelumnya diyakini mendominasi banyak jaringan dan sel mamalia.
“Dengan PANDORA-seq, kami menemukan dinamika microRNA / tsRNA / rsRNA yang belum pernah terjadi sebelumnya saat sel somatik diprogram ulang menjadi sel induk berpotensi majemuk terinduksi, yang dihasilkan oleh sel dewasa dan memiliki sifat yang mirip dengan sel induk embrionik, membuatnya mampu berdiferensiasi menjadi semua. jenis sel tubuh, “kata Sihem Cheloufi, asisten profesor biokimia di UCR dan rekan penulis makalah. “Beberapa tsRNA dan rsRNA dapat mempengaruhi sintesis protein dan bahkan mempengaruhi diferensiasi garis keturunan sel induk embrionik dalam sel induk embrionik.”
Chen menjelaskan kelas RNA kecil pada mamalia yang paling banyak dipelajari saat ini adalah microRNA, yang melimpah di sel somatik mamalia dan mengontrol jenis dan jumlah protein yang dibuat sel; dan piRNA, yang terutama diekspresikan di testis dan memodulasi perkembangan sel germinal.
“Saat ini, RNA kecil ini dapat diprofilkan secara komprehensif dengan metode throughput tinggi seperti sekuensing RNA,” katanya. “Namun, protokol sekuensing RNA kecil yang banyak digunakan memiliki keterbatasan intrinsik, yang mencegah RNA nonkode kecil tertentu yang dimodifikasi agar tidak terdeteksi selama sekuensing RNA. PANDORA-seq mengatasi keterbatasan ini.”
Junchao Shi, seorang mahasiswa doktoral yang bekerja di lab Chen dan penulis pertama makalah penelitian sangat antusias tentang penggunaan PANDORA-seq.
“Metode baru dapat merevolusi pandangan lanskap RNA kecil,” katanya. “Terus terang, semua penelitian sebelumnya yang menggunakan pengurutan RNA tradisional sekarang mungkin perlu ditinjau kembali.”
Cheloufi mengatakan tim sekarang ingin memahami bagaimana tsRNA / rsRNA dihasilkan, bagaimana fungsinya dalam sel induk, dan bagaimana mereka mengatur keputusan nasib sel selama perkembangan.
“Jawaban atas pertanyaan ini tepat waktu untuk mengembangkan alat diagnostik, mengidentifikasi target terapeutik, dan memajukan pengobatan regeneratif,” katanya.
Saat mengembangkan PANDORA-seq, Chen teringat perumpamaan orang buta dan gajah, yang mengajarkan kebenaran hanya terungkap ketika berbagai bagian bersatu.
“Kami terkadang melupakan gambaran besarnya, hanya berfokus pada sebagian kecil saja,” katanya. “Mungkin satu-satunya cara untuk sampai pada kebenaran total – gambaran besarnya – adalah mendorong batas pengetahuan kita dan mengkonfirmasi kebenaran yang terungkap dengan teknologi yang baru dirancang.”
“Sangat menarik untuk mengamati melalui lensa mikroskop di laboratorium perubahan nasib sel yang mendalam selama pemrograman ulang dan diferensiasi seluler,” kata Reuben Franklin, seorang mahasiswa doktoral di laboratorium Cheloufi dan rekan penulis studi tersebut. “Tapi PANDORA-seq memungkinkan kami untuk menguping pemain molekuler selama proses ini.” [Sciencedaily, dirgamedia.net]